按照《中华人民共和国食品安全法》有关规定，为规范食品快速检测方法使用，我局组织制定了《蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威等5种农药残留快速检测方法（征求意见稿）》，现向社会公开征求意见。请于2017年8月4日前通过电子邮件反馈意见。

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蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威等

5种农药残留快速检测方法

（征求意见稿）

1　范围

本方法规定了蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威等5种农药残留快速检测方法。

本方法适用于油菜、菠菜、芹菜、韭菜等蔬菜中敌敌畏、敌百虫、丙溴磷、克百威、灭多威等5种农药残留的快速测定。

酶抑制（率）法（分光光度法）

2　原理

在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率。

3　试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

3.1　试剂

3.1.1　丙酮（CH3COCH3）。

3.1.2　磷酸氢二钾（K2HPO4）。

3.1.3　磷酸二氢钾（KH2PO4）。

3.1.4　5,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（C14H8N2O8S2）。

3.1.5　碳酸氢钠（NaHCO3）。

3.1.6　碘化乙酰硫代胆碱（ C7H16INOS）。

3.1.7　pH8.0缓冲溶液：分别称取11.9g无水磷酸氢二钾及3.2g磷酸二氢钾，溶解于1000mL水中，混匀。

3.1.8　显色剂：分别取160mg 5,5-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（DTNB）和15.6mg碳酸氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存。

3.1.9　底物：取125mg碘化乙酰硫代胆碱，加15mL蒸馏水溶解，摇匀后置于4℃冰箱中保存备用。保存期不超过两周。

3.1.10　乙酰胆碱酯酶：4℃冰箱中保存备用。

3.2　参考物质

3种有机磷和2种氨基甲酸酯类农药参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥98%。

表1 有机磷和氨基甲酸酯类参考物质中文名称、英文名称、

CAS登录号、分子式、相对分子质量

3.3　标准溶液的配制

3.3.1　克百威、灭多威、敌敌畏、敌百虫标准储备液（1000μg/mL）：冷藏、避光、干燥条件下保存。

3.3.2　丙溴磷标准储备液（100μg/mL）：冷藏、避光、干燥条件下保存。

3.3.3　克百威、灭多威、敌敌畏、敌百虫标准中间液A（100μg/mL）：精密移取上述标准储备液（1000μg/mL）（3.3.1）各1mL，分别置于10mL容量瓶中，用丙酮（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100 μg/mL的标准中间液A。

3.3.4　克百威、灭多威、敌敌畏、敌百虫、丙溴磷标准中间液B（1μg/mL）：精密移取标准中间液A（100μg/mL）（3.3.3）及丙溴磷标准储备液（100μg/mL）（3.3.2）各1mL，分别置于100mL容量瓶中，用缓冲溶液（3.1.7）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 μg/mL的标准中间液B。

4　仪器和设备

4.1　恒温水浴锅。

4.2　天平：感量为 0.01 g和0.1mg。

4.3　分光光度计或相应商品化测定仪。

4.4　环境条件：温度15℃~35℃，湿度≤80%。

5　分析步骤

5.1　试样的提取

5.1.1　整株提取法

选取韭菜、芹菜有代表性的样品，擦去表面泥土，称取试样3g（精确至0.01g）置于表面皿中，加入10mL缓冲液（3.1.7），残缺面不得接触缓冲液，轻轻振摇50次，静置2min以上，取上清液备用。

5.1.2　整体测定法

选取油菜、菠菜有代表性的样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，称取3g（精确至0.01g）放入离心管中，加入10mL缓冲溶液（3.1.7），振摇50次，静置2min以上，倒出提取液，静置3min~5min，待用。

5.2　测定步骤

5.2.1　对照液的测定

先于反应管中加入3mL缓冲溶液（3.1.7），再加入适量酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃水浴锅中放置15min。加入0.1mL底物摇匀，立即测定吸光度，3min后再测定一次，记录反应3min的吸光度值的变化∆A0。

5.2.2　样品液的测定

先于反应管中加入3mL提取液，其他操作与对照液操作（5.2.1）相同，记录反应3min的吸光度值的变化∆At。

5.3　质控试验

每次测定应同时进行空白试验和加标质控试验。

5.3.1　空白试验

称取空白试样，按照 5.1 和 5.2 步骤与样品同法操作。

5.3.2　加标质控试验